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顯微鏡的種類

微生物實驗室可使用各種類型的顯微鏡。顯微鏡具有多種用途和修改形式,有助于其實用性。

光學(xué)顯微鏡。實驗室中使用的普通光學(xué)顯微鏡稱為復(fù)合顯微鏡,因為它包含兩種類型的可放大物體的透鏡。zui靠近眼睛的晶狀體稱為目鏡,而zui靠近物體的晶狀體稱為物鏡。大多數(shù)顯微鏡在其底座上都有一個稱為聚光鏡的設(shè)備,該設(shè)備將光線會聚為強(qiáng)光束。甲隔膜位于所述冷凝器控制光通過它的到來的量。在光學(xué)顯微鏡上可以找到粗調(diào)和精調(diào)(圖)。

為了放大物體,光線會通過舞臺上的一個開口投射,然后撞擊物體然后進(jìn)入物鏡。創(chuàng)建一個圖像,該圖像成為用于放大該圖像的眼鏡的對象。因此,用顯微鏡可能得到的總放大倍數(shù)是物鏡實現(xiàn)的放大倍數(shù)乘以目鏡獲得的放大倍數(shù)。

復(fù)合光學(xué)顯微鏡通常包含四個物鏡:掃描透鏡(4X),低倍透鏡(10X),高倍透鏡(40 X)和油浸透鏡(100 X)。使用放大10倍的目鏡,掃描鏡頭的總放大倍數(shù)將為40 X,低倍鏡的放大倍數(shù)為100 X,高倍鏡的放大倍數(shù)為400 X,油浸鏡頭的放大倍數(shù)為1000X。大多數(shù)顯微鏡都是近焦的。這個術(shù)語意味著當(dāng)一個顯微鏡從一個物鏡切換到下一個物鏡時,顯微鏡將保持聚焦。

在顯微鏡下清楚地看到兩個項目作為獨立對象的能力稱為顯微鏡的分辨率。分辨率部分取決于用于觀察的光的波長。可見光的波長約為550nm,而紫外光的波長約為400nm或更小。顯微鏡的分辨率隨著波長的減小而增加,因此紫外線使人們能夠檢測可見光看不到的物體。鏡頭的分辨力是指該鏡頭可以看到的zui小物體的尺寸。分辨力基于所用光的波長和透鏡的數(shù)值孔徑。的數(shù)值孔徑(NA)指可以進(jìn)入透鏡的zui寬的光錐;NA刻在物鏡的側(cè)面。

如果用戶要清楚地看到物體,則必須有足夠的光進(jìn)入物鏡。對于現(xiàn)代顯微鏡,對于掃描,低倍和高倍鏡頭而言,進(jìn)入物鏡并不是問題。但是,油浸鏡頭非常狹窄,大多數(shù)光線都無法射中。因此,該對象的觀看效果很差且沒有分辨率。為了提高油浸鏡頭的分辨率,在鏡頭和載玻片之間放了一滴浸油(圖)。浸入的油具有與載玻片相同的抗彎能力(折射率),因此當(dāng)浸入油穿過載玻片到達(dá)油并到達(dá)物鏡時,它保持光線成一直線,即浸油鏡片。隨著進(jìn)入物鏡的光量的增加,物體的分辨率提高,人們可以觀察到像細(xì)菌一樣小的物體。分辨率在其他類型的顯微鏡中也很重要。

其他光學(xué)顯微鏡。除了熟悉的復(fù)合顯微鏡外,微生物學(xué)家還可以將其他類型的顯微鏡用于特定目的。這些顯微鏡可以觀察光學(xué)顯微鏡無法看到的物體。

另一種可選的顯微鏡是暗視野顯微鏡,用于觀察活的螺旋體,例如引起梅毒的螺旋體。該顯微鏡包含一個特殊的聚光器,該聚光器會散射光并使它以一定角度從樣本反射回來。在深色背景上可以看到一個輕的物體。

第二種替代顯微鏡是相襯顯微鏡。該顯微鏡還包含特殊的聚光器,它們會“異相”投射光,并使其以不同的速度穿過物體。用該顯微鏡可以清楚地看到未染色的活生物體,并且可以用該儀器看到內(nèi)部細(xì)胞部分,例如線粒體,溶酶體和高爾基體。

熒光顯微鏡利用紫外光作為其光源。當(dāng)紫外線照射到物體上時,它會激發(fā)物體的電子,并且它們發(fā)出各種陰影的光。由于使用紫外線,因此物體的分辨率提高。一種稱為熒光抗體技術(shù)的實驗室技術(shù)使用熒光染料和抗體來幫助識別未知細(xì)菌。

電子顯微鏡。電子顯微鏡中使用的能源是電子束。由于光束的波長非常短,因此光束會撞擊其路徑中的大多數(shù)物體,并顯著提高顯微鏡的分辨率。用此儀器可以看到病毒和一些大分子。電子在真空中傳播,以避免與偏轉(zhuǎn)的空氣分子接觸,磁鐵將光束聚焦在要觀察的物體上。在監(jiān)視器上創(chuàng)建圖像并由技術(shù)人員查看。

電子顯微鏡的更傳統(tǒng)形式是透射電子顯微鏡(TEM)。要使用此儀器,可將超薄的微生物或病毒切片放在線柵上,然后在觀察之前用金或鈀染色。樣品的密集涂層部分使電子束偏轉(zhuǎn),圖像上同時出現(xiàn)了暗區(qū)和亮區(qū)。

的掃描電子顯微鏡(SEM)是在更現(xiàn)代的形式電子顯微鏡。盡管此顯微鏡的放大率低于TEM,但SEM允許對微生物和其他物體進(jìn)行三維觀察。使用整個物體,并使用金或鈀染色。

光學(xué)顯微鏡。(a)普通光學(xué)顯微鏡的重要部分。(b)浸油如何收集更多的光以供顯微鏡使用。

為了放大物體,光線會通過舞臺上的一個開口投射,然后撞擊物體然后進(jìn)入物鏡。創(chuàng)建一個圖像,該圖像成為用于放大該圖像的眼鏡的對象。因此, 用顯微鏡可能得到的  總放大倍數(shù)是物鏡實現(xiàn)的放大倍數(shù)乘以目鏡獲得的放大倍數(shù)。

復(fù)合光學(xué)顯微鏡通常包含四個  物鏡:  掃描透鏡(4X),低倍透鏡(10X),高倍透鏡(40 X)和油浸透鏡(100 X)。使用放大10倍的目鏡,掃描鏡頭的總放大倍數(shù)為40 X,低倍鏡的放大倍數(shù)為100 X,高倍鏡的放大倍數(shù)為400 X,油浸鏡頭的放大倍數(shù)為1000X。大多數(shù)顯微鏡都是近  焦的。這個術(shù)語意味著當(dāng)一個顯微鏡從一個物鏡切換到下一個物鏡時,顯微鏡將保持聚焦。

在顯微鏡下清楚地看到兩個項目作為獨立對象的能力稱為顯微鏡的  分辨率  。分辨率部分取決于用于觀察的光的波長??梢姽獾牟ㄩL約為550nm,而紫外光的波長約為400nm或更小。顯微鏡的分辨率隨著波長的減小而增加,因此紫外線使人們能夠檢測可見光看不到的物體。 鏡頭的  分辨力是指該鏡頭可以看到的zui小物體的尺寸。分辨力基于所用光的波長和透鏡的數(shù)值孔徑。的數(shù)值孔徑(NA) 指可以進(jìn)入透鏡的zui寬的光錐;NA刻在物鏡的側(cè)面。

如果用戶要清楚地看到物體,則必須有足夠的光進(jìn)入物鏡。對于現(xiàn)代顯微鏡,對于掃描鏡,低倍鏡和高倍鏡而言,進(jìn)入物鏡并不是問題。但是,油浸鏡頭非常狹窄,大多數(shù)光線都無法射中。因此,該對象的觀看效果很差且沒有分辨率。為了提高油浸鏡頭的分辨率,在 鏡頭和載玻片之間放置一滴  浸油(圖  1)。 )。浸入的油具有與載玻片相同的抗彎能力(折射率),因此當(dāng)浸入油穿過載玻片到達(dá)油并到達(dá)物鏡時,油會保持在一條直線上,即浸油鏡片。隨著進(jìn)入物鏡的光量的增加,物體的分辨率提高,人們可以觀察到像細(xì)菌一樣小的物體。分辨率在其他類型的顯微鏡中也很重要。

其他光學(xué)顯微鏡。 除了熟悉的復(fù)合顯微鏡外,微生物學(xué)家還可以將其他類型的顯微鏡用于特定目的。這些顯微鏡可以觀察光學(xué)顯微鏡無法看到的物體。

另一種顯微鏡是  暗視野顯微鏡,用于觀察活的螺旋體,例如引起梅毒的螺旋體。該顯微鏡包含一個特殊的聚光器,該聚光器會散射光并使它以一定角度從樣本反射回來。在深色背景上可以看到一個輕的物體。

第二種替代顯微鏡是  相襯顯微鏡。 該顯微鏡還包含特殊的聚光器,它們會“異相”投射光,并使其以不同的速度穿過物體。用該顯微鏡可以清楚地看到未染色的活生物體,并且可以用該儀器看到內(nèi)部細(xì)胞部分,例如線粒體,溶酶體和高爾基體。

該  熒光顯微鏡  利用紫外光作為其光源。當(dāng)紫外線照射到物體上時,它會激發(fā)物體的電子,并且它們發(fā)出各種陰影的光。由于使用紫外線,因此物體的分辨率提高。一種稱為熒光抗體技術(shù)的實驗室技術(shù)采用熒光染料和抗體來幫助識別未知細(xì)菌。

電子顯微鏡。電子顯微鏡中  使用的能源是  電子  束。由于光束的波長非常短,因此光束會撞擊其路徑中的大多數(shù)物體,并顯著提高顯微鏡的分辨率。用此儀器可以看到病毒和一些大分子。電子在真空中傳播,以避免與偏轉(zhuǎn)的空氣分子接觸,磁鐵將光束聚焦在要觀察的物體上。在監(jiān)視器上創(chuàng)建圖像并由技術(shù)人員查看。

電子顯微鏡的更傳統(tǒng)形式是  透射電子顯微鏡(TEM)。 要使用此儀器,可將超薄的微生物或病毒切片放在線柵上,然后在觀察之前用金或鈀染色。樣品的密集涂層部分使電子束偏轉(zhuǎn),圖像上同時出現(xiàn)了暗區(qū)和亮區(qū)。

的  掃描電子顯微鏡(SEM)  是在更現(xiàn)代的形式電子顯微鏡。盡管該顯微鏡的放大率低于TEM,但SEM允許對微生物和其他物體進(jìn)行三維觀察。使用整個物體,并使用金或鈀染色。