好的顯微鏡應(yīng)具有三個特性：

1. 良好的分辨率：分辨率能力是指產(chǎn)生緊密放置的對象的單獨圖像的能力，以便可以將它們區(qū)分為兩個單獨的實體。分辨率：
   • 肉眼約為0.2 mm（200μm）
   • 光學(xué)顯微鏡約為0.2μm
   • 電子顯微鏡約為0.5 nm
     。分辨率取決于折射率。油的折射率比空氣高。
2. 良好的對比度：可以通過對樣本進(jìn)行染色來進(jìn)一步改善。
3. 良好的放大倍率：這是通過使用凹透鏡實現(xiàn)的。

明場或光學(xué)顯微鏡

明場或光顯微鏡在較亮的背景下形成深色圖像。

暗視野顯微鏡

原理：在暗視野顯微鏡中，物體在黑暗背景下顯得明亮。這可以通過使用特殊的暗場聚光鏡來實現(xiàn)。

應(yīng)用范圍：用于鑒定活的，未染色的細(xì)胞和螺旋菌等薄細(xì)菌，這些細(xì)菌無法通過光學(xué)顯微鏡觀察。

相襯顯微鏡

它通過在細(xì)胞與水之間形成對比度差異來可視化活細(xì)胞。它將折射率和細(xì)胞密度的細(xì)微差異轉(zhuǎn)換為易于檢測的光強(qiáng)變化。

對于研究以下內(nèi)容很有用：

• 微生物運(yùn)動
• 確定活細(xì)胞的形狀
• 檢測細(xì)菌成分，如內(nèi)生孢子和包涵體。

熒光顯微鏡

原理：當(dāng)熒光染料暴露于紫外線（UV）時，它們會被激發(fā)并發(fā)出熒光，即它們將這種不可見的短波長射線轉(zhuǎn)換為更長波長的光（可見光）。

應(yīng)用：落射熒光顯微鏡具有以下應(yīng)用：

• 當(dāng)置于紫外線燈下時，例如環(huán)孢菌素，自發(fā)熒光
• 涂有熒光染料的微生物，例如用于瘧疾寄生蟲（QBC）的A啶橙和用于結(jié)核分枝桿菌的金胺酚。
• 免疫熒光：它使用熒光染料標(biāo)記的抗體來檢測細(xì)胞表面抗原或與細(xì)胞表面抗原結(jié)合的抗體。共有三種類型：直接IF，間接IF和流式細(xì)胞儀。

電子顯微鏡

它是由恩斯特·魯斯卡（Ernst Ruska）于1931年**的。它與光學(xué)顯微鏡的不同之處不同。

EM有兩種類型：

• 透射EM（MC型，檢查內(nèi)部結(jié)構(gòu)，分辨率0.5 nm，給出二維視圖）
• 掃描EM（檢查表面，分辨率為7 nm，提供3維視圖）

透射電子顯微鏡的原理

樣品制備：對細(xì)胞進(jìn)行以下步驟以制備非常薄的樣品（20至100 nm厚）

• 固定：使用戊二醛或四氧化固定細(xì)胞，以使其穩(wěn)定。
• 脫水：然后將樣品用有機(jī)溶劑（例如丙酮或乙醇）脫水。
• 包埋：將標(biāo)本包埋在塑料聚合物中，然后硬化形成固體塊。大多數(shù)塑料聚合物是水不溶性的。因此，在包埋之前必須將樣品完全脫水。
• 切片：然后用超薄切片刀將標(biāo)本切成薄片，并將切片安裝在金屬載玻片（銅）上。

冷凍蝕刻技術(shù)：這是一種用于標(biāo)本制備的可視化細(xì)胞內(nèi)部細(xì)胞器的替代方法。

將細(xì)胞迅速冷凍，然后加熱→用刀暴露內(nèi)部細(xì)胞器使其破裂→升華→用鉑和碳涂層遮蓋。

提高EM對比度的措施包括：

• 通過重金屬鹽（如檸檬酸鉛和乙酸鈾酰）的溶液染色
• 用重金屬如磷鎢酸或乙酸鈾酰進(jìn)行負(fù)染色。
• 陰影：標(biāo)本以45°角涂有鉑或其他重金屬的薄膜，使金屬僅在一側(cè)撞擊微生物。