熒光顯微鏡原理
- 大多數細胞成分是無色的,在顯微鏡下無法清楚地區(qū)分。熒光顯微鏡的基本前提是用染料對組分進行染色。
- 熒光染料,也稱為熒光團或熒光染料,是吸收給定波長(通常為UV)的激發(fā)光,并在短暫的延遲后發(fā)出更長波長的光的分子。吸收和發(fā)射之間的延遲可以忽略不計,通常約為納秒。
- 然后可以從激發(fā)光中濾出發(fā)射光以揭示熒光團的位置。
- 熒光顯微鏡使用強度更高的光照射樣品。該光激發(fā)樣品中的熒光物質,然后發(fā)出更長波長的光。
- 產生的圖像基于第二種光源或熒光物質的發(fā)射波長,而不是zui初用于照明和激發(fā)樣品的光。
加工
激發(fā)波長的光通過物鏡聚焦在樣品上。樣品發(fā)出的熒光通過物鏡聚焦在檢測器上。由于大多數激發(fā)光都透射過樣品,因此只有反射的激發(fā)光與發(fā)射光一起到達物鏡。
形式
“熒光顯微鏡”是指使用熒光生成圖像的任何顯微鏡,無論是諸如落射熒光顯微鏡這樣的更簡單的裝置,還是諸如共焦顯微鏡之類的更復雜的設計,其都使用光學切片來獲得更好的分辨率。熒光圖像。
使用的大多數熒光顯微鏡是落射熒光顯微鏡,其中熒光團的激發(fā)和熒光的檢測是通過相同的光路(即通過物鏡)完成的。